基因敲除單克隆細(xì)胞株構(gòu)建技術(shù)原理

CRISPR-Cas9是基于細(xì)菌和古細(xì)菌適應(yīng)性免疫系統(tǒng)開發(fā)的基因編輯技術(shù)。該系統(tǒng)包含一個可以特異性識別靶DNA序列的gRNA，和一個可以結(jié)合和編輯DNA的Cas9核酸酶，在gRNA的引導(dǎo)下，Cas9蛋白精確識別并切割目標(biāo)DNA序列。Cas9蛋白中的兩個核酸酶活性位點(diǎn)分別切割靶序列中的兩條鏈［一個核酸酶活性位點(diǎn)作用于一條鏈］，產(chǎn)生雙鏈斷裂（DSB）。雙鏈斷裂通常通過非同源末端連接（NHEJ）來修復(fù)，在修復(fù)過程中，常常會產(chǎn)生非三倍數(shù)的插入或缺失（indel），導(dǎo)致移碼突變，造成靶基因失活，從而實(shí)現(xiàn)基因敲除。

相比于會殘留部分基因功能的RNA干擾技術(shù)，基因敲除可以將基因功能完全消除，所以已經(jīng)被越來越多地用于基因功能研究中。

輝駿生物采用CRISPR-Cas9技術(shù)構(gòu)建的基因敲除單克隆細(xì)胞株，可實(shí)現(xiàn)對細(xì)胞基因組靶位點(diǎn)的永久敲除。

基因敲除單克隆細(xì)胞株構(gòu)建技術(shù)哪家好-輝駿生物保證目標(biāo)基因編輯/表達(dá)效果.jpg

基因敲除單克隆細(xì)胞株構(gòu)建技術(shù)優(yōu)勢

非病毒系統(tǒng)的基因遞送：電轉(zhuǎn)法，可實(shí)現(xiàn)高效基因遞送且脫靶率低

周期短：不需要進(jìn)行慢病毒包裝等步驟，實(shí)驗(yàn)周期短，細(xì)胞交付快至6周

使用高效的電轉(zhuǎn)設(shè)備，具備更高的電轉(zhuǎn)效率和細(xì)胞存活率

優(yōu)化的單克隆細(xì)胞篩選方法，陽性率大幅提高，使實(shí)驗(yàn)一步到位

聯(lián)系技術(shù)支持

18927549347、13430303037

基因敲除單克隆細(xì)胞株構(gòu)建實(shí)驗(yàn)流程圖

**基因敲除單克隆細(xì)胞株構(gòu)建 * 輝駿服務(wù)內(nèi)容**

服務(wù)內(nèi)容

交付內(nèi)容

周期

價格

1. 預(yù)實(shí)驗(yàn)：

細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)測試、抗性篩選測試、單克隆生長測試

1、單克隆細(xì)胞株：2個T25瓶（10^6個細(xì)胞/瓶）

2、結(jié)題報告：質(zhì)粒構(gòu)建、克隆篩選、敲除鑒定等操作和結(jié)果

6-10周

點(diǎn)擊詢價

2. 正式實(shí)驗(yàn)：

gRNA序列設(shè)計、cas9-gRNA載體構(gòu)建、電轉(zhuǎn)細(xì)胞、多克隆細(xì)胞株篩選、單克隆細(xì)胞株篩選、敲除效率驗(yàn)證、細(xì)胞擴(kuò)大培養(yǎng)和保存

基因敲除單克隆細(xì)胞株構(gòu)建 * 輝駿服務(wù)優(yōu)勢

效果保障，不成功不收費(fèi)

無效全額退款，100%保證目標(biāo)基因編輯/表達(dá)效果

效率保障

快至6周即可交付合格細(xì)胞株，高效實(shí)驗(yàn)流程

售后保障

實(shí)驗(yàn)疑問隨時快速響應(yīng)，專業(yè)技術(shù)團(tuán)隊(duì)全程跟進(jìn)

**基因敲除單克隆細(xì)胞株構(gòu)建實(shí)驗(yàn) * 輝駿生物服務(wù)案例**

本案例在人HCT116細(xì)胞中進(jìn)行基因編輯，電轉(zhuǎn)后篩選獲得的單克隆細(xì)胞，通過PCR和Sanger測序驗(yàn)證表明，該細(xì)胞在sgRNA2和sigRNA3靶位點(diǎn)分別發(fā)生缺失1個堿基的純合突變，可引起移碼敲除。Western-Blot實(shí)驗(yàn)確認(rèn)了敲除結(jié)果。

基因敲除細(xì)胞株定制-輝駿生物快至6周交付-不成功不收費(fèi).jpg