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Pull down實驗提速50%的秘訣:4類蛋白標簽選擇指南!

蛋白標簽是指利用DNA重組技術,在目標蛋白質的N端或C端附加上的特定氨基酸序列(短肽或蛋白)。它不僅能輔助目標蛋白的表達、純化和定位檢測,更能作為“關鍵工具”助力互作蛋白的捕獲與驗證,是開展Pull-downCo-IP等互作實驗的基礎。

表位標簽、親和標簽和熒光標簽是三類最常用的蛋白標簽。其中,親和標簽常用于蛋白pull-down實驗—通過親和層析技術,將帶標簽的“誘餌蛋白”固定在能與標簽特異性結合的親和介質上,再與含潛在“獵物蛋白”的樣品(如細胞裂解液)孵育,通過洗脫和檢測(Western-blot質譜),確定與誘餌蛋白結合的“獵物蛋白”。

還在被互作實驗用的各種蛋白標簽搞得頭大?它們在互作實驗里到底有啥用、有什么區(qū)別?今天一次性捋清楚,讓你看完不再懵圈。

輝駿生物在本文主要給大家介紹pull-down實驗中最常見的4種親和標簽,分別為:His、GST、Strep、MBP。

1 His標簽

His標簽通常由6-10個連續(xù)組氨酸組成,His標簽能與二價金屬離子(如Ni2?或Co2?)形成配位鍵,從而與螯合的樹脂特異性結合,達到蛋白親和純化的目的。

通過咪唑來洗脫,蛋白純度一般,標簽也幾乎沒有促溶性,但是適用于原核、酵母、哺乳動物、昆蟲各類表達系統(tǒng),并且成本非常低。

適用實驗場景:標簽小,干擾少,最通用,適合大多數可溶性蛋白。


2 GST標簽

GST標簽來源于血吸蟲的谷胱甘肽S-轉移酶,分子量約26 kDa,利用GST與谷胱甘肽(一種含巰基的三肽,GSH)的高親和性進行蛋白純化。

通過還原型谷胱甘肽進行洗脫,蛋白純度較高,但有一定的促溶性,適合難溶蛋白,它通常用于原核或酵母系統(tǒng),并且成本相對高一些。

適用實驗場景:適合研究蛋白-蛋白相互作用(GST pull-down);GST標簽可增強部分蛋白可溶性,助力難溶誘餌蛋白的實驗。


3 Strep-tag II標簽

Strep-tag II標簽由8個氨基酸WSHPQFEK)組成的小標簽,與Strep-Tactin蛋白高度特異結合。

通過生物素進行溫和洗脫,單次純化的蛋白純度能達到90%以上,適用原核、酵母、哺乳動物、昆蟲各類表達系統(tǒng),但成本很高。

適用實驗場景:洗脫最溫和,不影響蛋白活性,適合后續(xù)需保持蛋白功能的實驗。


4 MBP標簽

MBP標簽是一種來源于大腸桿菌的天然蛋白,396個氨基酸殘基,分子量約為40 kDa。標簽結構中包含一個穩(wěn)定的β-折疊和α-螺旋結構域,形成一個深槽,可與麥芽糖或直鏈淀粉結合,從而實現目標蛋白的標記和分離。

通過麥芽糖進行洗脫,蛋白純度高,也有很強的促溶性,尤其對于在原核表達系統(tǒng)中易形成包涵體的蛋白,MBP標簽往往能提高其可溶表達比例,因而在特定情況下具有較強的實用價值。

適用實驗場景:適合難溶性誘餌蛋白(MBP能顯著提升蛋白溶解度);但標簽較大,需謹慎選擇。

輝駿生物4種親和標簽對比,分別為:His、GST、Strep、MBP,專業(yè)提供各類型標簽蛋白試劑盒.png

總體來說:

His 標簽——“性價比之王”,適合多數常規(guī)場景,如常見的His pull down;

GST標簽——“提高可溶性,最適合蛋白相互作用分析,GST pull down;

Strep-Tag II 標簽——“高純度、敏感蛋白首選”,適合嚴苛實驗需求;

MBP標簽——“難溶蛋白的救星”。


pull-down實驗產品試劑盒


 實驗類型
 產品名稱
 貨號
 RNA pull down
 F2-RNA pull-down試劑盒
 FI8701
 生物素RNA pull-down試劑盒
 FI8702
 CircRNA pull-down試劑盒
 FI8710
 DNA pull down
 DNA pull-down試劑盒
 FI8901
 蛋白 pull down
 GST pull-down試劑盒
 FI8804
 His pull-down試劑盒
 FI8805
 藥物 pull down
 生物素藥物pull-down試劑盒
 FI8601


如果你在蛋白標簽的選擇、表達策略或純化流程上還有疑問,歡迎咨詢我們:4006991663。

輝駿生物提供各種類型蛋白互作試劑盒以及互作實驗服務RIP、RNA pull down、ChIP、DNA pull down、IP實驗),可根據實驗需求定進行選擇,助力您的科研更高效、更精準!

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